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熒光信號檢測中怎樣選擇合適的濾光片
2022-04-22
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       使用合適的濾光片可在熒光成像時選擇合適的光線
       濾光片組合放在在熒光檢測顯微鏡的不同光點上,用以設(shè)定激發(fā)樣品的光線波長,并準確捕捉熒光發(fā)射的波長。

       激發(fā)濾光片、二向分色鏡以及發(fā)射濾光片通常包含在同一立方體內(nèi),通常被設(shè)計來匹配特定熒光團或熒光蛋白的光譜。偶爾情況下,濾光片也可能不在立方體內(nèi),但會安裝在一個轉(zhuǎn)輪(稱為濾光片轉(zhuǎn)盤)上。濾光片轉(zhuǎn)盤使您可以混合搭配盡可能匹配所需要的激發(fā)和發(fā)射波長。其終極目標是捕獲到您希望從結(jié)合靶標的熒光基團束上捕獲的光信號,同時阻斷系統(tǒng)其他部分的任何光線(環(huán)境光、激發(fā)光源等)。

       熒光信號檢測濾光片的不同類型
      通常情況下,濾光片組被設(shè)計成可用于捕獲指定熒光團的最大激發(fā)和發(fā)射波長,但不會捕獲所有的熒光。多數(shù)現(xiàn)代化濾光片組的設(shè)計旨在確保激發(fā)濾光片只允許指定波長區(qū)間的光線通過。這種類型的濾光片稱為帶通濾光片(band-pass filter)。帶通濾光片通常通過中間波長和區(qū)間寬度確定。在較為簡單的熒光顯微鏡裝置中,一旦激發(fā)光線離開激發(fā)濾光片,即會照射到靶標上,靶標上的熒光基團隨即變?yōu)榧ぐl(fā)狀態(tài),然后發(fā)射向光譜的紅外端(相對于激發(fā)光線)遷移的光線。并非所有此類發(fā)射光線都會被檢測器捕獲到——僅那些允許通過二向分色鏡且能通過發(fā)射濾光片的光線。發(fā)射濾光片通常為帶通濾光片或長通濾光片,具體取決于特定的熒光團和成像實驗。如果您希望讓超過特定波長的光線通過檢測器,可選擇長通濾光片。